Septin 6 Plasmide Double Nickase (h): sc-405243-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Septin 6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Septin 6 Double Nickase Plasmid (h) e il Septin 6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SEPT6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Septin 6 Antibody (B-8): sc-514781
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Septin 6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405243-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Septin 6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405243-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEPT6 codifica la septina 6, una proteina citoscheletrica conservata che lega il GTP e si assembla in filamenti e anelli di septine etero-oligomerici, fungendo da impalcatura per le membrane e coordinando la dinamica di actina e microtubuli. La septina 6 contribuisce alla citocinesi, alla polarità cellulare, al traffico vescicolare e alla compartimentazione in sedi quali il solco di clivaggio e le regioni di crescita dei neuriti, influenzando la forma cellulare e la fedeltà della divisione. Grazie ai suoi ruoli nel rimodellamento del citoscheletro e nell’organizzazione delle membrane, SEPT6 è oggetto di studio nei circuiti che controllano la progressione mitotica e il trasporto intracellulare. Un assemblaggio delle septine deregolato o un’espressione alterata di SEPT6 sono stati associati a fenotipi anomali di proliferazione e differenziamento, a sostegno della sua rilevanza negli studi di biologia dei tumori e dei processi di neurosviluppo.
Septin 6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SEPT6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SEPT6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SEPT6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SEPT6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.