SEMA6C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422889

Panoramica

Sema6c codifica la semaforina di classe 6 SEMA6C, un segnale guida transmembrana che regola la segnalazione dipendente dal contatto durante la formazione dei pattern tissutali. Attraverso interazioni con i recettori plexinici e la segnalazione associata delle GTPasi della famiglia Rho, SEMA6C influenza il rimodellamento del citoscheletro, la polarità cellulare, la migrazione e la crescita dei neuriti. Le vie semaforina–plexina sono inoltre implicate nella formazione dei fasci assonali e nella connettività sinaptica, e un’alterata segnalazione delle semaforine è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi in sistemi modello. Inoltre, i membri della famiglia SEMA6 possono modulare il comportamento delle cellule vascolari e immunitarie, sostenendo lo studio della comunicazione cellula–cellula nello sviluppo e in contesti legati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema6c in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema6c insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema6c a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA6C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema6c per lo studio della segnalazione di SEMA6C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema6c critici per la funzione di SEMA6C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema6c per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA6C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA6C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema6c. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA6C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA6C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema6c per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema6c definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.