SEMA5B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422886

Panoramica

Sema5b codifica per il segnale di guida transmembrana SEMA5B, un membro della famiglia delle semaforine che regola la segnalazione dipendente dal contatto durante lo sviluppo neurale e l’assemblaggio dei circuiti sinaptici. SEMA5B influenza la guida assonale, il patterning dendritico e la crescita dei neuriti attraverso vie che coinvolgono i recettori plexin e il rimodellamento del citoscheletro a valle. Nei modelli murini, alterazioni dell’attività di Sema5b sono state associate a cambiamenti nella connettività e nella plasticità neuronale, a sostegno della sua rilevanza per lo studio dei meccanismi delle malattie del neurosviluppo e neuropsichiatriche. La sua espressione nel sistema nervoso lo rende anche un nodo utile per indagare i programmi di comunicazione cellula–cellula che plasmano il patterning dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema5b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema5b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema5b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA5B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema5b per lo studio della segnalazione di SEMA5B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema5b critici per la funzione di SEMA5B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema5b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA5B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema5b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA5B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA5B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema5b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema5b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.