SEMA3A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400716-LAC

SEMA3A codifica la semaforina-3A, un segnale guida secreto che si lega ai recettori neuropilina e plexina per regolare il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione direzionale e la crescita dei neuriti. Attraverso la segnalazione delle semaforine, SEMA3A influenza la guida assonale, l’organizzazione sinaptica e il patterning vascolare modulando le GTPasi della famiglia Rho e la dinamica dell’actina a valle. In contesti immunitari e stromali, SEMA3A può modellare il traffico cellulare e l’adesione, collegando la sua attività ai microambienti infiammatori e al rimodellamento tissutale. Una segnalazione di SEMA3A deregolata è stata studiata nei processi di neurosviluppo e neurodegenerazione, nelle interazioni tumore–microambiente e nella patobiologia associata all’angiogenesi.

Le particelle di attivazione lentivirale SEMA3A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SEMA3A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SEMA3A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SEMA3A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SEMA3A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SEMA3A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.