Selenoprotein S Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404444-ACT

SELENOS codifica la Selenoproteina S, una selenoproteina di membrana del reticolo endoplasmatico che supporta la degradazione associata al RE (ERAD) e la proteostasi promuovendo la rimozione di proteine ripiegate in modo errato. Attraverso la modulazione della segnalazione dello stress del RE e dell’omeostasi redox, la Selenoproteina S influenza le vie della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response) e gli output della segnalazione infiammatoria. Variazioni nell’espressione di SELENOS sono state collegate a una produzione alterata di citochine e alla suscettibilità a fenotipi metabolici e immuno-correlati, riflettendo il suo ruolo all’interfaccia tra stress ossidativo e infiammazione. In quanto gene umano coinvolto nel controllo qualità del RE, SELENOS è spesso studiato in contesti di adattamento allo stress cronico, attivazione dei macrofagi e risposte cellulari a insulti proteotossici.

Selenoprotein S Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELENOS senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Selenoprotein S Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELENOS nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELENOS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Selenoprotein S. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELENOS nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Selenoprotein S nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Selenoprotein S nelle cellule tumorali con espressione di SELENOS silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.