Selenoprotein P Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417457-ACT

SELENOP codifica la selenoproteina P, una glicoproteina secreta che funge da principale fattore di trasporto del selenio nel plasma e supporta la distribuzione sistemica del selenio ai tessuti periferici. Attraverso la fornitura di selenio per la biosintesi delle selenoenzimi, SELENOP contribuisce all’omeostasi redox cellulare, alla difesa antiossidante e alla protezione dallo stress ossidativo e infiammatorio, con implicazioni per la funzione epatica e la regolazione metabolica. Un’espressione alterata di SELENOP è stata associata a risposte disfunzionali allo stress ossidativo e a fenotipi di malattia metabolica, ed è spesso studiata nel contesto della segnalazione dell’insulina, del metabolismo lipidico e delle vie infiammatorie. In quanto fattore circolante simile a un’epatochina, la selenoproteina P viene anche utilizzata come readout molecolare dei programmi secretori epatici e del controllo trascrizionale responsivo ai nutrienti.

Selenoprotein P Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELENOP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Selenoprotein P Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELENOP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELENOP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Selenoprotein P. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELENOP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Selenoprotein P nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Selenoprotein P nelle cellule tumorali con espressione di SELENOP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.