selenocysteine lyase Plasmide Double Nickase (m): sc-424520-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- selenocysteine lyase Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il selenocysteine lyase Double Nickase Plasmid (m) e il selenocysteine lyase Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Scly. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
selenocysteine lyase Plasmide Double Nickase (m) | sc-424520-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Scly codifica la selenocisteina liasi, un enzima dipendente dal fosfato di piridossale che degrada la selenocisteina in alanina rilasciando selenio per il riutilizzo. Questa attività sostiene l’omeostasi del selenio e si interseca con il metabolismo delle selenoproteine influenzando la riserva di selenio biodisponibile necessaria per le vie antiossidanti e di regolazione redox. Attraverso i suoi effetti sull’equilibrio redox cellulare, la funzione di Scly è rilevante per gli studi sulle risposte allo stress ossidativo e sulla regolazione metabolica nei tessuti sensibili al selenio. Un’alterata gestione del selenio è stata collegata a fenotipi che influenzano il metabolismo energetico e la resilienza allo stress, rendendo Scly un bersaglio utile per modelli meccanicistici della biologia del selenio.
selenocysteine lyase Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Scly nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Scly. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Scly. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Scly interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.