SELENBP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403679-ACT

SELENBP1 (proteina 1 legante il selenio) è una proteina citosolica associata al selenio implicata nell’omeostasi redox cellulare e nella regolazione metabolica, con ruoli descritti in processi legati alla detossificazione e nella modulazione del ripiegamento proteico e delle risposte allo stress ossidativo. La sua espressione è spesso alterata in molteplici tipi di tumore e in contesti infiammatori, rendendola un utile indicatore molecolare dei cambiamenti nello stato di differenziamento, nell’adattamento cellulare allo stress e nella rimodulazione del metabolismo. SELENBP1 è stata collegata a vie che intersecano la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, il metabolismo degli xenobiotici e le transizioni di stato cellulare che influenzano fenotipi di proliferazione e migrazione. Di conseguenza, SELENBP1 è comunemente studiata come marcatore funzionale e regolatore in modelli meccanicistici di biologia del cancro, rimodellamento tissutale e segnalazione responsiva allo stress.

SELENBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELENBP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SELENBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELENBP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELENBP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SELENBP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELENBP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SELENBP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SELENBP1 nelle cellule tumorali con espressione di SELENBP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.