Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SELB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409155
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SELB Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SELB, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SELB Antibody (G-9): sc-166521
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SELB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409155 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
EEFSEC codifica il fattore di allungamento della traduzione specifico per la selenocisteina SELB (eEFSec), un componente chiave del macchinario specializzato che inserisce la selenocisteina nei codoni UGA durante la sintesi delle selenoproteine umane. SELB coopera con i fattori che si legano al SECIS e con il Sec-tRNA per supportare la ricodifica traduttiva, influenzando così l’omeostasi redox cellulare, le risposte allo stress ossidativo e il controllo qualità delle proteine attraverso la produzione di selenoenzimi. Regolando la resa delle vie antiossidanti e di tiolo-redox, l’attività di EEFSEC può modificare la suscettibilità al danno ossidativo e la segnalazione adattativa allo stress. La deregolazione della biosintesi delle selenoproteine è stata associata ad alterazioni del tono infiammatorio e a fenotipi metabolici, rendendo EEFSEC un bersaglio rilevante per studi meccanicistici nella biologia redox legata alle malattie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SELB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EEFSEC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EEFSEC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EEFSEC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SELB.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EEFSEC per lo studio della segnalazione di SELB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni EEFSEC critici per la funzione di SELB
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EEFSEC per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SELB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SELB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EEFSEC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SELB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SELB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EEFSEC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EEFSEC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.