Sec5 Plasmide Double Nickase (h): sc-405088-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sec5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sec5 Double Nickase Plasmid (h) e il Sec5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EXOC2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sec5 Antibody (F-7): sc-393230
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sec5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sec5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EXOC2 umano codifica Sec5, una subunità essenziale del complesso esocistico octamerico, che coordina spazialmente l’ancoraggio e la fusione delle vescicole secretorie alla membrana plasmatica. Sec5 integra segnali provenienti da piccole GTPasi, tra cui RalA/RalB, per collegare il traffico vescicolare con l’esocitosi polarizzata, il rimodellamento di membrana e la consegna mirata di recettori e molecole di adesione. Attraverso queste funzioni, EXOC2 contribuisce a processi quali la migrazione cellulare, la citocinesi e il mantenimento della polarità epiteliale, e la sua deregolazione è stata associata ad alterazioni dell’output di segnalazione collegate alla trasformazione oncogenica e al comportamento invasivo. Sec5 è stato inoltre utilizzato per studiare come il traffico dipendente dall’esocisto influenzi il riciclo dei recettori e l’organizzazione delle vie di segnalazione in diversi tipi cellulari umani.
Sec5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EXOC2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EXOC2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EXOC2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EXOC2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.