SEC23 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403549-ACT

Il gene umano **SEC23A** codifica **SEC23**, un componente essenziale del rivestimento **COPII** che media la gemmazione delle vescicole dai siti di uscita del reticolo endoplasmatico e la selezione del carico per il trasporto dal RE al Golgi. SEC23 si coordina con **SEC24** e con la GTPasi **SAR1** per guidare l’assemblaggio del coat, contribuendo al flusso della via secretoria, alla proteostasi e alla corretta maturazione della matrice extracellulare e delle proteine di membrana. L’alterazione del traffico COPII può modificare la glicosilazione, le risposte allo stress del RE e le reti di segnalazione dipendenti dalla secrezione, importanti nello sviluppo e nell’omeostasi tissutale. Varianti patogene di **SEC23A** sono state associate a fenotipi craniofacciali e scheletrici, rendendo SEC23A un nodo utile per studiare i meccanismi di malattia legati alla secrezione in modelli cellulari umani.

SEC23A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEC23A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SEC23A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEC23A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEC23A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SEC23A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEC23A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SEC23A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SEC23A nelle cellule tumorali con espressione di SEC23A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.