SDHD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-403276-KO-2

Panoramica

La subunità D del complesso succinato deidrogenasi (SDHD) è un componente essenziale di ancoraggio alla membrana del complesso II mitocondriale, che accoppia l’ossidazione del succinato nel ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA) al trasferimento di elettroni nel pool dell’ubichinone della via della fosforilazione ossidativa (OXPHOS). Sostenendo la conversione del succinato in fumarato e il flusso lungo la catena respiratoria, SDHD contribuisce a mantenere l’equilibrio redox mitocondriale, la produzione di ATP e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. L’alterazione della funzione di SDHD modifica la segnalazione metabolica, inclusa la regolazione succinato-dipendente delle vie di risposta all’ipossia e risposte più ampie allo stress mitocondriale. La disregolazione di SDHD è implicata in sindromi di predisposizione tumorale ereditarie e sporadiche che interessano linee neuroendocrine e paragangliari, rendendola un utile bersaglio per studi meccanicistici sul metabolismo mitocondriale e sulla segnalazione rilevante per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SDHD (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SDHD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SDHD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SDHD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SDHD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SDHD per lo studio della segnalazione di SDHD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SDHD critici per la funzione di SDHD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SDHD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SDHD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SDHD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SDHD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SDHD Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SDHD (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SDHD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SDHD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.