SDHAF2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425801-ACT

Il gene murino **Sdhaf2** codifica **SDHAF2**, un fattore accessorio necessario per la flavinazione e la maturazione della subunità catalitica **SDHA** della succinato deidrogenasi (complesso II). Consentendo il corretto assemblaggio e la piena attività del complesso II, SDHAF2 sostiene l’accoppiamento del ciclo dell’acido tricarbossilico con la catena di trasporto degli elettroni mitocondriale, influenzando l’ossidazione del succinato, l’equilibrio redox e la capacità respiratoria. L’alterazione della funzione di SDHAF2 è associata a disfunzione mitocondriale e a un’alterata segnalazione metabolitica, inclusa l’accumulazione di succinato che può interferire con vie sensibili all’ipossia e con meccanismi epigenetici. Di conseguenza, **Sdhaf2** è ampiamente studiato nella bioenergetica, nelle risposte allo stress ossidativo e in modelli in cui difetti del complesso II contribuiscono alla biologia tumorale e ai meccanismi delle malattie neuroendocrine.

SDHAF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sdhaf2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SDHAF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sdhaf2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sdhaf2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SDHAF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sdhaf2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SDHAF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SDHAF2 nelle cellule tumorali con espressione di Sdhaf2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.