Plasmide CRISPR d'Activation (h) SDF-1/CXCL12: sc-400268-ACT

CXCL12 (SDF‑1/CXCL12) est une chimiokine CXC homéostatique qui transmet principalement ses signaux via CXCR4 et CXCR7/ACKR3 afin de réguler la chimiotaxie, la survie cellulaire et l’organisation tissulaire. Cet axe coordonne le trafic des leucocytes, la rétention des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques dans les niches de la moelle osseuse, ainsi que le développement vasculaire et neural, via des voies de signalisation en aval telles que PI3K–AKT, MAPK/ERK, JAK/STAT et des signalisations dépendantes du calcium. Les gradients de CXCL12 façonnent les interactions tumeur–stroma, les programmes angiogéniques et le tropisme métastatique, et une signalisation CXCL12–CXCR4 dérégulée est impliquée dans la physiopathologie inflammatoire et l’infiltration des cellules immunitaires. En tant que signal du microenvironnement, CXCL12 est fréquemment étudiée pour son rôle dans la migration et l’adhérence cellulaires, ainsi que le remodelage des niches, dans des contextes de recherche en cancérologie, fibrose et immunologie.

SDF-1/CXCL12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CXCL12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SDF-1/CXCL12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CXCL12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CXCL12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SDF-1/CXCL12. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CXCL12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SDF-1/CXCL12 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SDF-1/CXCL12 dans les cellules tumorales présentant une expression de CXCL12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.