SDF-1/CXCL12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400268-ACT

CXCL12 (SDF-1/CXCL12) è una chemochina CXC omeostatica che segnala principalmente attraverso CXCR4 e CXCR7/ACKR3 per regolare la chemotassi, la sopravvivenza cellulare e l’organizzazione tissutale. Questo asse coordina il traffico leucocitario, la ritenzione di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche nelle nicchie del midollo osseo e lo sviluppo vascolare e neurale tramite la segnalazione a valle PI3K–AKT, MAPK/ERK, JAK/STAT e dipendente dal calcio. I gradienti di CXCL12 modellano le interazioni tumore–stroma, i programmi angiogenici e il tropismo metastatico, e una segnalazione CXCL12–CXCR4 deregolata è implicata nella patobiologia infiammatoria e nell’infiltrazione di cellule immunitarie. Come segnale del microambiente, CXCL12 è spesso studiata per il suo ruolo nella migrazione e adesione cellulare e nel rimodellamento della nicchia in ambiti di ricerca su cancro, fibrosi e immunologia.

SDF-1/CXCL12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CXCL12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SDF-1/CXCL12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CXCL12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CXCL12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SDF-1/CXCL12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CXCL12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SDF-1/CXCL12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SDF-1/CXCL12 nelle cellule tumorali con espressione di CXCL12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.