Scratch1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410173

Panoramica

SCRT1 codifica Scratch1, un fattore di trascrizione a dita di zinco che agisce prevalentemente come repressore trascrizionale nelle linee cellulari neurali, contribuendo a coordinare i programmi di differenziazione, migrazione e maturazione neuronale. Scratch1 opera all’interno di reti regolatorie geniche che intersecano i fattori proneurali bHLH e il controllo trascrizionale correlato all’EMT, modellando le transizioni di stato cellulare e la dinamica del citoscheletro durante lo sviluppo. Modulando l’espressione genica specifica di linea e reprimendo programmi non neuronali, SCRT1 contribuisce al mantenimento dell’identità neuronale e a un controllo della proliferazione dipendente dal contesto. Programmi trascrizionali associati a SCRT1 e deregolati sono stati studiati in fenotipi di neuro-sviluppo e in oncologia, dove i regolatori dello sviluppo vengono spesso riutilizzati per influenzare lo stato di differenziazione e l’invasività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Scratch1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SCRT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SCRT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SCRT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Scratch1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SCRT1 per lo studio della segnalazione di Scratch1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SCRT1 critici per la funzione di Scratch1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SCRT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Scratch1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Scratch1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SCRT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Scratch1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Scratch1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SCRT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SCRT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.