SART-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407069

Panoramica

DSE codifica per la dermatan solfato epimerasi, un enzima residente nel RE/Golgi che converte l’acido D‑glucuronico in acido L‑iduronico nelle catene di condroitin/dermatan solfato, contribuendo così a determinare la struttura dei proteoglicani e le proprietà della matrice extracellulare (ECM). Modulando la composizione dei glicosaminoglicani, DSE influenza la fibrillogenesi del collagene, l’adesione cellula–matrice e la disponibilità di fattori di crescita, con possibili effetti su programmi di segnalazione come TGF‑β e altre vie sensibili all’ECM. Alterazioni della biosintesi del dermatan solfato sono state associate a fenotipi del tessuto connettivo e a un rimodellamento stromale disregolato; la perturbazione di DSE è studiata in contesti che includono la fibrosi e la biologia del microambiente tumorale. In parte della letteratura il gene è citato anche con il nome della proteina SART‑2, che può comparire in studi su antigeni ed espressione a seconda delle convenzioni di annotazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SART-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DSE in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DSE insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DSE a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SART-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DSE per lo studio della segnalazione di SART-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DSE critici per la funzione di SART-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DSE per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SART-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SART-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DSE. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SART-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SART-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DSE per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DSE definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.