SAPS1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406315

Panoramica

PPP6R1 codifica SAPS1, una subunità regolatoria della protein fosfatasi 6 (PP6) che contribuisce a indirizzare l’attività catalitica verso specifici substrati e compartimenti subcellulari. Attraverso l’assemblaggio del complesso PP6, SAPS1 partecipa a programmi di defosforilazione su serina/treonina che influenzano la progressione del ciclo cellulare, l’organizzazione del fuso mitotico e la segnalazione della risposta al danno al DNA. La fosforegolazione mediata da PP6 interseca vie attivate dallo stress e il controllo dei checkpoint, plasmando la stabilità del genoma e la capacità proliferativa. La disregolazione delle subunità regolatorie di PP6 è stata implicata in alterazioni dell’omeostasi della fosforilazione osservate in diversi contesti patologici, incluso il rimodellamento dei circuiti di segnalazione associato al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SAPS1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP6R1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP6R1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP6R1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SAPS1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP6R1 per lo studio della segnalazione di SAPS1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PPP6R1 critici per la funzione di SAPS1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP6R1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SAPS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SAPS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP6R1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SAPS1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SAPS1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP6R1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP6R1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.