SAP 49 Plasmide Double Nickase (h): sc-407057-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SAP 49 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SAP 49 Double Nickase Plasmid (h) e il SAP 49 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SF3B4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SAP 49 Antibody (G-12): sc-365570
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SAP 49 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407057-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 49 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407057-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SF3B4 codifica SAP 49, un componente centrale del sottocomplesso SF3b all’interno della piccola ribonucleoproteina nucleare U2, che contribuisce al riconoscimento delle sequenze del punto di ramificazione durante lo splicing del pre‑mRNA. Supportando l’assemblaggio dello spliceosoma e la selezione dei siti di splicing, SAP 49 contribuisce all’integrità del trascrittoma e alla regolazione a valle dell’elaborazione dell’RNA, dei programmi del ciclo cellulare e delle risposte allo stress. L’alterazione dello splicing dipendente da SF3B4 è associata a una modificata espressione delle isoforme e ad ampi cambiamenti nelle reti di regolazione genica osservati in molteplici contesti patologici, inclusi tumori e disturbi dello sviluppo. In quanto fattore dello spliceosoma, SAP 49 è spesso studiata nei meccanismi di fedeltà dello splicing, nel controllo dello splicing alternativo e nelle relazioni genotipo‑isoforma.
SAP 49 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SF3B4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SF3B4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SF3B4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SF3B4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.