SAP 49 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-407057-KO-2

Panoramica

SF3B4 codifica la subunità 4 del fattore di splicing 3B (SAP 49), un componente centrale dell’U2 snRNP all’interno del complesso SF3b, che favorisce il riconoscimento accurato del punto di ramificazione e del sito di splicing 3′ durante lo splicing del pre‑mRNA. Contribuendo all’assemblaggio e alla stabilizzazione dei complessi A e B dello spliceosoma, SAP 49 influenza la selezione delle isoforme trascrizionali e sostiene programmi coordinati di espressione genica legati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e alla differenziazione. La compromissione della fedeltà dello spliceosoma può determinare alterazioni diffuse dello splicing alternativo e un rimodellamento del proteoma, rendendo SF3B4 un nodo utile per lo studio delle reti di processamento dell’RNA nelle cellule umane. Un’espressione alterata di SF3B4 e la disfunzione dello spliceosoma sono state associate a stati patologici in cui lo splicing aberrante contribuisce alle risposte cellulari allo stress e a una crescita deregolata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SAP 49 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SF3B4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SF3B4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SF3B4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SAP 49.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SF3B4 per lo studio della segnalazione di SAP 49, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SF3B4 critici per la funzione di SAP 49
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SF3B4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SAP 49 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SAP 49 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SF3B4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SAP 49 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SAP 49 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SF3B4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SF3B4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.