SAP 18 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404214-LAC

SAP18 (SAP 18) codifica una componente centrale del macchinario di repressione trascrizionale che si interfaccia con la deacetilazione degli istoni e il rimodellamento della cromatina per modulare i programmi di espressione genica. SAP18 si associa al complesso Sin3/HDAC e contribuisce al controllo epigenetico della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e della trascrizione in risposta allo stress. Attraverso queste interazioni, SAP18 aiuta a coordinare vie che regolano l’elaborazione dell’RNA e gli output trascrizionali legati alla stabilità del genoma. La repressione dipendente da SAP18, quando deregolata, è stata studiata nel contesto di stati aberranti della cromatina rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi che coinvolgono un’alterata regolazione epigenetica.

Le particelle di attivazione lentivirale SAP 18 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SAP18 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SAP 18 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SAP18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SAP 18. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SAP18 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.