SA-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401222

Panoramica

STAG2 codifica la subunità SA-2 della coesina umana, un componente centrale del complesso della coesina che media la coesione tra cromatidi fratelli e l’organizzazione del genoma a livello superiore. SA-2 sostiene la corretta segregazione dei cromosomi durante mitosi e meiosi, contribuisce alla riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e aiuta a regolare le interazioni a lunga distanza tra enhancer e promotori che modellano i programmi trascrizionali. Attraverso questi ruoli, STAG2 si interseca con il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress replicativo e le vie legate all’architettura della cromatina. L’alterazione di STAG2 è frequentemente osservata nella genomica dei tumori ed è associata a instabilità cromosomica e a una regolazione genica alterata, rendendolo un locus ampiamente studiato nella ricerca sul mantenimento del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SA-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STAG2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STAG2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STAG2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SA-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STAG2 per lo studio della segnalazione di SA-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STAG2 critici per la funzione di SA-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STAG2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SA-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SA-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STAG2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SA-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SA-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STAG2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STAG2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.