S-100A10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402230-ACT

S100A10 codifica S-100A10 (p11), un membro della famiglia S100 che lega il Ca2+ e che forma un eterotetramero funzionale con l’annessina A2 a livello della membrana plasmatica e dei compartimenti endosomiali. Questo complesso coordina l’attivazione del plasminogeno e la proteolisi pericellulare, influenzando il rimodellamento della matrice extracellulare, l’adesione cellulare e la migrazione direzionale tramite processi del citoscheletro e del traffico di membrana. S-100A10 partecipa inoltre alla segnalazione infiammatoria e alle vie di risposta allo stress modulando la localizzazione dei recettori e le reti di proteasi sulla superficie cellulare. Un’espressione deregolata di S100A10 è stata riportata in molteplici contesti patologici, tra cui invasione e metastasi associate al cancro, rimodellamento vascolare e fibrotico e fenotipi neuroinfiammatori, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico nella ricerca focalizzata su specifiche vie di segnalazione.

S-100A10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di S100A10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

S-100A10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus S100A10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione S100A10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di S-100A10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus S100A10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da S-100A10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via S-100A10 nelle cellule tumorali con espressione di S100A10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.