RUNX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400803-ACT

RUNX1 (AML1) è un fattore di trascrizione specifico per sequenza del complesso core-binding factor, che coordina la specificazione delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, l’impegno di linea e la maturazione delle popolazioni mieloidi e linfoidi. Regola programmi genici che controllano proliferazione, differenziamento e apoptosi attraverso il legame a enhancer e promotori in collaborazione con cofattori come CBFβ e rimodellatori della cromatina, intersecando reti di segnalazione citochiniche e dello sviluppo. Alterazioni del dosaggio o della funzione di RUNX1 sono fortemente associate a neoplasie ematologiche e sindromi di insufficienza midollare, incluse traslocazioni ricorrenti e mutazioni puntiformi che perturbano il controllo trascrizionale dell’ematopoiesi. In quanto nodo centrale nelle decisioni di destino delle cellule del sangue, RUNX1 è ampiamente studiato nella regolazione trascrizionale, nel rimodellamento epigenetico e nella modellizzazione di vie rilevanti per la leucemia.

RUNX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RUNX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RUNX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RUNX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RUNX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RUNX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RUNX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RUNX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RUNX1 nelle cellule tumorali con espressione di RUNX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.