Rrn3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403709-ACT

Il gene umano **RRN3** codifica il fattore di inizio della trascrizione della RNA polimerasi I **Rrn3** (noto anche come **TIF-IA**), un regolatore centrale della sintesi dell’RNA ribosomiale e della funzione nucleolare. Rrn3 fa da ponte tra la Pol I e i fattori legati al promotore per consentire la trascrizione del pre-rRNA e sostiene la biogenesi dei ribosomi, collegando così le esigenze di crescita cellulare alla capacità di sintesi proteica. La sua attività è controllata in modo rigoroso da vie di segnalazione nutrienti- e crescita-dipendenti, incluse **mTOR** e **MAPK/ERK**, tramite regolazioni post-traduzionali che modulano la competenza all’inizio della Pol I. La trascrizione della Pol I deregolata e lo stress nucleolare associati a un’alterata funzione di RRN3 sono rilevanti per la biologia della proliferazione e per le risposte cellulari allo stress, spesso studiate in ambito oncologico e nella segnalazione metabolica.

Rrn3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RRN3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Rrn3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RRN3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RRN3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Rrn3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RRN3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Rrn3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Rrn3 nelle cellule tumorali con espressione di RRN3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.