RPTPα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422515
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RPTPα Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RPTPα, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RPTPα Antibody (H-4): sc-398203
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RPTPα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422515 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene **Ptpra** nel topo codifica la fosfatasi tirosinica proteica di tipo recettoriale alfa (**RPTPα**), una fosfatasi transmembrana che modula la segnalazione de-fosforilando residui di tirosina inibitori sulle chinasi della famiglia Src e su substrati correlati. Attraverso questa attività, influenza l’adesione mediata da integrine, la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e la segnalazione a valle **MAPK/ERK**, che nel loro insieme plasmano programmi di proliferazione, migrazione e differenziamento. RPTPα interagisce inoltre con il crosstalk dei recettori tirosin-chinasici e può regolare le soglie di segnalazione in contesti neuronali e immuno-correlati. Una segnalazione di Ptpra deregolata è stata associata a processi rilevanti per la trasformazione oncogena e il comportamento invasivo, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sull’equilibrio chinasi/fosfatasi nelle vie associate alla malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RPTPα (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ptpra in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ptpra insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ptpra a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RPTPα.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ptpra per lo studio della segnalazione di RPTPα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ptpra critici per la funzione di RPTPα
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ptpra per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RPTPα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RPTPα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ptpra. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RPTPα Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RPTPα (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ptpra per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ptpra definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.