RPGR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404441

Panoramica

RPGR (regolatore della GTPasi della retinite pigmentosa) codifica una proteina ciliare arricchita nel cilio di connessione dei fotorecettori, dove supporta il trasporto intraflagellare e il traffico di carichi associati alla membrana necessari al mantenimento del segmento esterno. RPGR interagisce con complessi associati alle ciglia e contribuisce a processi di trasporto basati sui microtubuli che preservano la struttura del cilio e la competenza di segnalazione. L’alterazione di RPGR compromette la funzione ciliare e l’omeostasi dei fotorecettori, collegando la sua perdita di funzione a fenotipi di degenerazione retinica ereditaria, come la retinite pigmentosa legata all’X. Nella ricerca biomedica, RPGR è comunemente studiato nel contesto dei meccanismi delle ciliopatie, della biologia cellulare dei fotorecettori e delle relazioni genotipo–fenotipo nelle patologie retiniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RPGR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RPGR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RPGR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RPGR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RPGR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RPGR per lo studio della segnalazione di RPGR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RPGR critici per la funzione di RPGR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RPGR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RPGR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RPGR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RPGR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RPGR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RPGR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RPGR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RPGR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.