ROR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401324-ACT

ROR2 codifica per il receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2, una proteina transmembrana a singolo passaggio che funziona principalmente come co-recettore WNT non canonico, con un forte accoppiamento alla segnalazione WNT5A. ROR2 regola il rimodellamento del citoscheletro, la polarità cellulare planare, la migrazione cellulare e la patterning dello sviluppo attraverso vie che intersecano le GTPasi Rho, la segnalazione JNK e programmi trascrizionali indipendenti dalla β-catenina. Nella biologia umana, un’espressione o una segnalazione di ROR2 alterata è associata a una morfogenesi aberrante e a una motilità cellulare disregolata, rendendolo rilevante per studi sullo sviluppo scheletrico, l’organizzazione dei tessuti e fenotipi cellulari invasivi. ROR2 è quindi ampiamente utilizzato come punto di ingresso meccanicistico per analizzare l’architettura delle vie WNT non canoniche e la segnalazione recettoriale dipendente dal contesto.

ROR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ROR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ROR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ROR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ROR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ROR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ROR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ROR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ROR2 nelle cellule tumorali con espressione di ROR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.