Rock-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400468-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rock-2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rock-2 Double Nickase Plasmid (h) e il Rock-2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ROCK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rock-2 Antibody (D-11): sc-398519
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rock-2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400468-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rock-2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400468-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano ROCK2 codifica la proteina chinasi 2 contenente il dominio coiled-coil associato a Rho (Rock-2), una chinasi serina/treonina che agisce a valle di RhoA per controllare la contrattilità actomiosinica, la formazione di fibre di stress, la dinamica delle adesioni focali e la polarità cellulare. La segnalazione di ROCK2 si interfaccia con programmi di rimodellamento del citoscheletro che influenzano la migrazione cellulare, la citocinesi e la meccanotrasduzione, con effetti a valle sulla fosforilazione della catena leggera della miosina e sul turnover dell’actina mediato da LIMK/cofilina. Un’alterata attività di ROCK2 è stata collegata a una disregolazione del tono vascolare e della funzione endoteliale, a risposte fibrotiche guidate dall’attivazione dei miofibroblasti e a fenotipi invasivi in modelli di cellule tumorali. Queste connessioni di via rendono ROCK2 un nodo ampiamente utilizzato per studiare la regolazione del citoscheletro dipendente dalle GTPasi Rho e le dipendenze di segnalazione specifiche del contesto.
Rock-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ROCK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ROCK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ROCK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ROCK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.