RNF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422689

Übersicht

Rnf4 kodiert RNF4, eine SUMO‑targetierte Ubiquitin‑Ligase (STUbL) vom RING‑Typ, die polySUMOylierte Proteine erkennt und deren Ubiquitinierung katalysiert, um deren Abbau einzuleiten oder Proteinkomplexe umzubauen. In Mauszellen trägt RNF4 zur Regulation von DNA‑Schadensantworten bei, indem es die Entfernung SUMO‑modifizierter Reparatur‑ und Signalfaktoren fördert und so SUMOylierung mit ubiquitinabhängiger Proteostase verknüpft. Diese Aktivität unterstützt die Genomstabilität, den Umgang mit Replikationsstress und die Transkriptionskontrolle durch die dynamische Regulation nukleärer Proteinzusammenschlüsse. Eine Fehlregulation STUbL‑vermittelter Signalwege ist allgemein relevant für zelluläre Transformation sowie neurodegenerative Phänotypen, die mit beeinträchtigter Proteinqualitätskontrolle und defekter DNA‑Reparatur einhergehen.

Das RNF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rnf4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rnf4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rnf4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RNF4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rnf4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RNF4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rnf4-Exone abzielen, die für die RNF4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rnf4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RNF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RNF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rnf4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RNF4 HDR-Plasmid (m) und RNF4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rnf4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rnf4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.