RNF213 Plasmide Double Nickase (h): sc-418450-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF213 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF213 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF213 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF213. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RNF213 Antibody (5C12): sc-293391
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF213 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418450-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF213 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418450-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF213 codifica una grande ligasi E3 dell’ubiquitina contenente un dominio RING finger e un’ATPasi AAA+ che contribuisce alla regolazione, dipendente dall’ubiquitina, del turnover proteico e della segnalazione in risposta allo stress. RNF213 è stata implicata in vie che coordinano l’omeostasi endoteliale e vascolare, la segnalazione infiammatoria e le risposte cellulari all’ipossia e allo stress metabolico, in linea con un ruolo nel rimodellamento angiogenico. Varianti genetiche e un’alterata funzione di RNF213 sono fortemente associate alla malattia di Moyamoya e ad altri fenotipi cerebrovascolari e vasculopatici, stimolando studi meccanicistici in modelli cellulari umani pertinenti. Inoltre, l’attività di RNF213 è stata collegata alla modulazione delle vie dell’immunità innata, rendendola un nodo utile per analizzare il cross-talk tra ubiquitinazione, infiammazione e biologia vascolare.
RNF213 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF213 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF213. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF213. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF213 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.