RNF20 Plasmide Double Nickase (h): sc-412695-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF20 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF20 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF20 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF20. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RNF20 Antibody (1594CT552.128.36): sc-517358
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF20 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF20 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF20 codifica una ligasi E3 ubiquitina-proteina che, insieme a RNF40, forma il complesso BRE1 responsabile della monoubiquitinazione dell’istone H2B (H2BK120ub). Questa modificazione della cromatina promuove l’allungamento trascrizionale e si collega a programmi a valle di metilazione degli istoni, influenzando l’espressione genica su scala genomica, la segnalazione del danno al DNA e la scelta delle vie di riparazione. L’attività di RNF20 è associata al mantenimento della stabilità genomica attraverso la regolazione delle risposte alle rotture a doppio filamento e del rimodellamento della cromatina associato alla replicazione. La deregolazione dell’ubiquitinazione istonica dipendente da RNF20 è stata correlata a reti trascrizionali alterate e all’instabilità genomica osservata in molteplici contesti patologici, a supporto del suo studio nei meccanismi epigenetici e di riparazione del DNA.
RNF20 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF20 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF20. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF20. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF20 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.