RNF182 Plasmide Double Nickase (h): sc-415138-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF182 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF182 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF182 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF182. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF182 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415138-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF182 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger che catalizza il trasferimento di ubiquitina su specifici substrati proteici, controllando così la stabilità delle proteine e l’ampiezza del segnale nel sistema ubiquitina–proteasoma. Attraverso una regolazione degli effettori intracellulari dipendente dall’ubiquitinazione, RNF182 è collegata a vie che governano le risposte allo stress cellulare, il controllo qualità delle proteine e il turnover di proteine associate alla membrana e di proteine di segnalazione. Un’espressione alterata di RNF182 è stata riportata in studi di biologia del sistema nervoso e di neuroinfiammazione, in linea con ruoli nell’omeostasi neuronale e nella proteostasi regolata. Queste caratteristiche rendono RNF182 un bersaglio utile per indagare come le ligasi dell’ubiquitina modellino le reti di segnalazione e le transizioni di stato cellulare in modelli cellulari umani.
RNF182 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF182 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF182. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF182. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF182 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.