RNF170 Plasmide Double Nickase (h): sc-410169-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF170 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF170 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF170 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF170. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF170 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410169-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF170 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING finger residente nel reticolo endoplasmatico, che supporta il controllo qualità delle proteine promuovendo l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomica di specifici substrati associati alla membrana. Attraverso la degradazione associata al RE (ERAD) e la segnalazione dipendente dall’ubiquitina, RNF170 contribuisce alla proteostasi e può influenzare vie legate al calcio e risposte allo stress connesse alla funzione del RE. Un’attività alterata di RNF170 è stata associata a una segnalazione dell’ubiquitina disregolata ed è stata studiata nel contesto della neurodegenerazione e di altri disturbi in cui l’omeostasi del RE è compromessa. Di conseguenza, RNF170 rappresenta un bersaglio utile per esplorare la specificità delle ligasi dell’ubiquitina, le risposte allo stress del RE e le reti di segnalazione a valle nelle cellule umane.
RNF170 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF170 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF170. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF170. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF170 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.