RNF165 Plasmide Double Nickase (h): sc-416077-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF165 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF165 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF165 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF165. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF165 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF165 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF165 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING, implicata nel controllo ubiquitina-dipendente della stabilità proteica e degli output di segnalazione nelle cellule umane. Catalizzando l’ubiquitinazione dei substrati, RNF165 dovrebbe influenzare la proteostasi, le vie responsivo-allo-stress e l’ampiezza e la durata delle cascate di trasduzione del segnale che dipendono dal turnover proteico regolato. La disregolazione dell’attività delle ligasi E3 e dei componenti della via dell’ubiquitina è ampiamente associata ad alterazioni del controllo del ciclo cellulare, della segnalazione dell’immunità innata e a fenotipi oncogenici, rendendo RNF165 un nodo utile per studi meccanicistici. L’analisi della funzione di RNF165 può aiutare a chiarire come la regolazione mediata dall’ubiquitina modelli l’omeostasi cellulare e la biologia delle malattie in modo dipendente dal contesto.
RNF165 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF165 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF165. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF165. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF165 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.