RNF149 Plasmide Double Nickase (m): sc-426694-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF149 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF149 Double Nickase Plasmid (m) e il RNF149 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Rnf149. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF149 Plasmide Double Nickase (m) | sc-426694-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Rnf149 codifica RNF149, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger che contribuisce al turnover proteico dipendente dall’ubiquitina e alla regolazione della proteostasi cellulare. Nell’ambito del controllo esercitato dal sistema ubiquitina–proteasoma, RNF149 è rilevante per vie che governano il controllo qualità delle proteine, l’intensità della segnalazione e le risposte adattative allo stress che determinano la sopravvivenza e l’omeostasi cellulare. Programmi di ubiquitinazione alterati sono ampiamente implicati in fenotipi associati a malattia, inclusi il controllo della crescita deregolato e lo stress proteotossico legato alla neurodegenerazione, rendendo RNF149 un nodo utile per studi meccanicistici. L’analisi funzionale di RNF149 supporta la ricerca su come le ligasi E3 modulino la stabilità dei substrati e gli output delle vie a valle nelle cellule di mammifero.
RNF149 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rnf149 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rnf149. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rnf149. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rnf149 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.