RNF149 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406588

Panoramica

RNF149 codifica una proteina contenente un dominio RING finger, prevista funzionare come ligasi E3 dell’ubiquitina, a supporto del controllo ubiquitina-dipendente della stabilità proteica e delle dinamiche di segnalazione. Le ligasi E3 di tipo RING contribuiscono a regolare la proteostasi, le risposte allo stress e il turnover dei componenti delle vie di segnalazione che influenzano la progressione del ciclo cellulare e le decisioni di sopravvivenza. RNF149 è quindi rilevante per comprendere come l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale coordinino l’omeostasi cellulare e la trasduzione del segnale. Alterazioni della regolazione della via dell’ubiquitina sono spesso associate alla biologia tumorale e ad altri disturbi legati al controllo qualità delle proteine, rendendo RNF149 un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF149 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RNF149 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RNF149 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RNF149 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RNF149.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RNF149 per lo studio della segnalazione di RNF149, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RNF149 critici per la funzione di RNF149
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RNF149 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RNF149 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RNF149 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RNF149. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RNF149 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RNF149 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RNF149 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RNF149 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.