RNF126 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405024-ACT

RNF126 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che contribuisce a regolare l’omeostasi proteica catalizzando il trasferimento di ubiquitina su substrati specifici, influenzandone stabilità, localizzazione e degradazione. Attraverso il controllo ubiquitina-dipendente di regolatori della segnalazione e del ciclo cellulare, RNF126 partecipa a vie che governano la proliferazione, le risposte al danno del DNA e programmi trascrizionali che plasmano le decisioni sul destino cellulare. Reti di ubiquitinazione deregolate che coinvolgono RNF126 sono state associate ad alterazioni del controllo della crescita e dell’adattamento allo stress in contesti rilevanti per il cancro, rendendolo un bersaglio utile per analizzare la segnalazione guidata dalla proteostasi. La modulazione sperimentale di RNF126 supporta studi meccanicistici sull’attività delle ligasi dell’ubiquitina, sul riconoscimento dei substrati e sul cross-talk tra vie in modelli cellulari umani.

RNF126 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RNF126 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RNF126 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RNF126 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RNF126, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RNF126. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RNF126 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RNF126 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RNF126 nelle cellule tumorali con espressione di RNF126 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.