Plasmide Double Nickase (h) RNase L: sc-403412-NIC

Le gène humain **RNASEL** code la RNase L, une endoribonucléase inductible par les interférons, activée par des oligoadénylates 2′-5′ produits par les enzymes OAS lors de la détection immunitaire innée d’ARN double brin viral ou cellulaire. Une fois activée, la RNase L clive l’ARN simple brin afin de limiter la réplication des agents pathogènes, de remodeler le transcriptome cellulaire et d’amplifier la signalisation antivirale via des voies telles que RIG-I/MDA5–MAVS et les réponses en aval à l’interféron de type I. L’activité de la RNase L influence également la stabilité des ARN, le contrôle de la traduction et les réponses au stress, ce qui l’inscrit dans une régulation plus large de la croissance cellulaire et de l’apoptose. Des variations génétiques ou une dérégulation de **RNASEL** ont été associées à une modification de la défense antivirale et à des phénotypes liés à l’inflammation, soulignant sa pertinence pour l’étude de la signalisation immunitaire et des mécanismes de susceptibilité aux maladies.

RNase L Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNASEL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNASEL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNASEL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNASEL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.