RNase H1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402850-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNase H1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- RNase H1 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal RNase H1 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal RNase H1 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di RNASEH1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RNase H1 Antibody (H-4): sc-376326
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNase H1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-402850-ACT | 20 µg | $397.00 |
RNASEH1 umano codifica RNasi H1, un’endonucleasi nucleare e mitocondriale che degrada in modo specifico il filamento di RNA negli ibridi RNA:DNA, favorendo la rimozione degli R-loop durante trascrizione e replicazione. Elaborando i primer di RNA e risolvendo intermedi ibridi, RNasi H1 contribuisce alla stabilità del genoma, alla replicazione e riparazione del DNA mitocondriale e al coordinamento dei conflitti tra replicazione e trascrizione. Un turnover deregolato degli ibridi RNA:DNA è stato collegato a stress replicativo e all’attivazione di segnali di danno al DNA, rendendo RNASEH1 un nodo rilevante per lo studio delle vie che collegano il metabolismo degli acidi nucleici alle risposte cellulari allo stress. Un’alterazione della funzione di RNasi H1 è inoltre associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale, permettendo indagini meccanicistiche sul mantenimento del genoma mitocondriale in contesti rilevanti per la malattia.
RNase H1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RNASEH1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
RNase H1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RNASEH1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RNASEH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RNase H1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RNASEH1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RNase H1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RNase H1 nelle cellule tumorali con espressione di RNASEH1 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.