RMI2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407104

Panoramica

RMI2 (RecQ mediated genome instability 2) codifica un componente conservato del dissolvasoma BLM–TOP3A–RMI1/2, che favorisce la dissoluzione delle doppie giunzioni di Holliday per sopprimere gli scambi tra cromatidi fratelli e mantenere la stabilità del genoma. Coordinando la gestione degli intermedi della ricombinazione omologa, RMI2 supporta una corretta ripartenza della forcella di replicazione e limita eventi di crossing-over aberranti durante la riparazione del DNA. Questa attività collega RMI2 alle principali vie della risposta al danno al DNA e al controllo dei checkpoint del ciclo cellulare in condizioni di stress replicativo. L’alterazione della funzione del dissolvasoma, inclusa un’attività di RMI2 modificata, è associata a un aumento dell’instabilità cromosomica e a fenotipi osservati in difetti di mantenimento del genoma correlati alla sindrome di Bloom, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi che contribuiscono ai processi mutazionali associati al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RMI2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RMI2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RMI2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RMI2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RMI2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RMI2 per lo studio della segnalazione di RMI2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RMI2 critici per la funzione di RMI2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RMI2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RMI2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RMI2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RMI2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RMI2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RMI2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RMI2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RMI2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.