Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RIP3 Plasmide Double Nickase (m): sc-425224-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RIP3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RIP3 Double Nickase Plasmid (m) e il RIP3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ripk3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RIP3 Antibody (B-2): sc-374639
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RIP3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIP3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-425224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ripk3 codifica la chinasi 3 serina/treonina che interagisce con il recettore (RIP3), un regolatore centrale della necrosi programmata (necroptosi) e della segnalazione infiammatoria. RIP3 coopera con RIP1 e MLKL per assemblare il necrosoma, promuovendo la disgregazione della membrana e il rilascio di pattern molecolari associati al danno (DAMP) che amplificano le risposte dell’immunità innata. Questa via si interseca con la segnalazione del recettore del TNF, con le vie TLR/TRIF e con il crosstalk con l’apoptosi e l’attivazione dell’inflammasoma, plasmando la produzione di citochine e le risposte cellulari allo stress. Un’attività di RIP3 deregolata è stata implicata in modelli di danno tissutale e infiammazione, inclusi fenotipi neuroinfiammatori e metabolici, rendendo Ripk3 un bersaglio comune per studi meccanicistici sulla morte cellulare e sull’omeostasi immunitaria.
RIP3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ripk3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ripk3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ripk3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ripk3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.