RIL Plasmide Double Nickase (h): sc-411188-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RIL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RIL Double Nickase Plasmid (h) e il RIL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PDLIM4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RIL Antibody (D-8): sc-166582
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RIL Plasmide Double Nickase (h) | sc-411188-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411188-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDLIM4 codifica RIL, una proteina adattatrice con domini PDZ-LIM che collega le strutture associate all’actina ai complessi di segnalazione, contribuendo a organizzare l’architettura del citoscheletro e la dinamica dell’adesione cellulare. RIL si associa alle fibre di stress dell’actina e ai componenti delle adesioni focali, influenzando processi quali forma cellulare, migrazione e meccanotrasduzione. Un’alterata espressione di PDLIM4 è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è spesso studiata nel contesto della transizione epitelio-mesenchimale, delle vie associate all’invasione e dei programmi di differenziamento. Queste caratteristiche rendono PDLIM4/RIL un nodo utile per analizzare la segnalazione accoppiata al citoscheletro e le risposte trascrizionali in modelli cellulari umani.
RIL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDLIM4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDLIM4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDLIM4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDLIM4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.