Rictor Plasmide Double Nickase (h): sc-400710-NIC

RICTOR codifica rictor, una componente di impalcatura essenziale del complesso mTOR 2 (mTORC2), che coordina la segnalazione dei fattori di crescita con il metabolismo cellulare, la sopravvivenza e l’organizzazione del citoscheletro. Attraverso la fosforilazione dipendente da mTORC2 delle chinasi AGC come AKT (Ser473), SGK1 e le isoforme di PKC, rictor regola l’output della segnalazione insulina/PI3K, i programmi di trasporto ionico e la dinamica dell’actina che influenzano migrazione e polarità cellulare. Un’attività deregolata di RICTOR/mTORC2 è spesso studiata in contesti di segnalazione oncogenica, disfunzione metabolica e rimodellamento adattativo allo stress, in cui un’alterata modulazione della via di AKT può rimodellare i fenotipi di proliferazione e resistenza. Di conseguenza, RICTOR è ampiamente utilizzato come punto di ingresso genetico per analizzare la topologia della rete mTOR e il crosstalk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

Rictor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RICTOR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RICTOR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RICTOR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RICTOR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.