Plásmido CRISPR de Activación (h) Rictor: sc-400710-ACT

RICTOR codifica Rictor, un componente andamiaje esencial del complejo mTOR 2 (mTORC2) que coordina la señalización de quinasas para regular la supervivencia celular, la proliferación, el metabolismo y la organización del citoesqueleto. Mediante la fosforilación dependiente de mTORC2 de quinasas de la familia AGC, incluidas AKT (Ser473), SGK y distintas isoformas de PKC, Rictor contribuye al ajuste fino de la vía PI3K–AKT, a la señalización de la insulina y a la dinámica de la actina. La expresión alterada de RICTOR o la actividad de mTORC2 se asocian con frecuencia a una señalización desregulada de factores de crecimiento y a la reprogramación metabólica observada en diversos contextos de cáncer y enfermedades metabólicas. Como nodo central en la detección de nutrientes y factores de crecimiento, Rictor se estudia ampliamente en los mecanismos de resistencia a fármacos, migración y diferenciación específica de linaje.

Rictor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RICTOR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rictor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RICTOR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RICTOR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rictor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RICTOR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rictor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rictor en células tumorales con expresión de RICTOR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.