Ribosomal Protein S3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402327-ACT

RPS3 codifica la proteina ribosomiale S3, un componente conservato della piccola subunità ribosomiale 40S, necessario per un avvio e un allungamento della traduzione accurati, sostenendo così la sintesi proteica globale e il controllo della crescita cellulare. Oltre al suo ruolo ribosomiale, RPS3 è stata implicata nella regolazione delle risposte allo stress e della stabilità del genoma, incluse interazioni con vie collegate al danno ossidativo e alla riparazione del DNA. Alterazioni nella biogenesi dei ribosomi e nel controllo della traduzione possono contribuire alla trasformazione oncogena e a cambiamenti del destino cellulare, rendendo RPS3 un nodo utile per studiare la proteostasi, i programmi proliferativi e la segnalazione adattativa allo stress. La disregolazione delle proteine ribosomiali e dei meccanismi di sorveglianza associati ai ribosomi è stata associata a ribosomopatie e a fenotipi correlati al cancro, supportando studi meccanicistici su come la perturbazione di RPS3 rimodelli l’output dal trascrittoma al proteoma.

Ribosomal Protein S3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RPS3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ribosomal Protein S3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RPS3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RPS3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ribosomal Protein S3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RPS3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ribosomal Protein S3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ribosomal Protein S3 nelle cellule tumorali con espressione di RPS3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.