Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein S19: sc-402405-ACT

RPS19 codifica la proteína ribosomal S19, un componente esencial de la subunidad ribosomal pequeña 40S que favorece la biogénesis de ribosomas y el inicio preciso de la traducción. Más allá de su papel estructural en el ribosoma, RPS19 contribuye a la maduración nucleolar del pre-ARNr y se integra con los programas celulares de proteostasis y respuesta al estrés que acoplan la síntesis de proteínas al control del crecimiento. La alteración de la función de RPS19 interrumpe la diferenciación eritroide y se asocia estrechamente con la anemia de Diamond–Blackfan y con la señalización de estrés dependiente de p53 vinculada a ribosomopatías. Como gen constitutivo central (housekeeping), la expresión de RPS19 también se utiliza para evaluar la capacidad de traducción, la función nucleolar y la adaptación al estrés metabólico o genotóxico en modelos de células humanas.

Ribosomal Protein S19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein S19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein S19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein S19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein S19 en células tumorales con expresión de RPS19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.