Riboflavin kinase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418359

Panoramica

Il gene umano RFK codifica la riboflavina chinasi, un enzima citosolico che fosforila la riboflavina (vitamina B2) a flavina mononucleotide (FMN), fornendo un precursore chiave per la biosintesi della flavina adenina dinucleotide (FAD). Regolando la disponibilità intracellulare di FMN/FAD, RFK sostiene reazioni redox dipendenti da flavoproteine che influenzano il metabolismo ossidativo mitocondriale, la difesa antiossidante e, più in generale, la bioenergetica cellulare. Alterazioni nell’utilizzo della riboflavina e nell’omeostasi dei cofattori flavinici sono state associate a disfunzioni metaboliche e a fenotipi legati allo stress ossidativo, rendendo RFK un nodo utile per lo studio dell’enzimologia dipendente dalle vitamine. La funzione di RFK è quindi rilevante per indagini sui processi mitocondriali, sulla segnalazione redox e sulla regolazione nutrienti–cofattori in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Riboflavin kinase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RFK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RFK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RFK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Riboflavin kinase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RFK per lo studio della segnalazione di Riboflavin kinase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RFK critici per la funzione di Riboflavin kinase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RFK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RFK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Riboflavin kinase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Riboflavin kinase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RFK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RFK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.