Rho T2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406496

Panoramica

RHOT2 codifica Rho T2 (nota anche come Miro2), un’atipica GTPasi della famiglia Rho ancorata alla membrana mitocondriale esterna, che contribuisce a coordinare il traffico, il posizionamento e il controllo di qualità dei mitocondri. Attraverso interazioni con proteine adattatrici che collegano i mitocondri ai motori dei microtubuli, RHOT2 contribuisce al trasporto dipendente dal citoscheletro e sostiene la distribuzione mitocondriale necessaria nelle regioni cellulari ad alta richiesta energetica. Rho T2 è inoltre implicata nella regolazione calcio-sensibile della dinamica e del turnover mitocondriale, intersecando vie che governano l’omeostasi mitocondriale e le risposte allo stress. La disfunzione di RHOT2 è stata studiata nel contesto di alterazioni della dinamica mitocondriale e della bioenergetica, processi frequentemente associati alla neurodegenerazione e alla riprogrammazione metabolica legata al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho T2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RHOT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RHOT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RHOT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rho T2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RHOT2 per lo studio della segnalazione di Rho T2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RHOT2 critici per la funzione di Rho T2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RHOT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rho T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rho T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RHOT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rho T2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rho T2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RHOT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RHOT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.