RGPD5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401666

Panoramica

RGPD5 (RANBP2-like and GRIP domain containing 5) è un membro specifico dei primati della famiglia genica RGPD, implicato nei processi di trasporto nucleo-citoplasmatico grazie all’omologia con domini associati a RANBP2/NUP358. Si ritiene che le proteine di questa famiglia influenzino il traffico regolato dalla GTPasi Ran, la progressione mitotica e l’organizzazione spaziale di complessi proteici a livello dell’involucro nucleare, con un impatto sui programmi globali di espressione genica. RGPD5 viene spesso discusso nel contesto delle duplicazioni segmentali sul cromosoma 2 e della variabilità del numero di copie, caratteristiche che complicano l’interpretazione specifica del locus negli studi genomici. La deregolazione o le variazioni strutturali nelle regioni della famiglia RGPD sono state esplorate in associazione con fenotipi proliferativi e instabilità genomica in dataset di genomica oncologica, a supporto del suo impiego come bersaglio per studi meccanicistici sul trasporto nucleare e sul controllo del ciclo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RGPD5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RGPD5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RGPD5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RGPD5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RGPD5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RGPD5 per lo studio della segnalazione di RGPD5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RGPD5 critici per la funzione di RGPD5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RGPD5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RGPD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RGPD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RGPD5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RGPD5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RGPD5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RGPD5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RGPD5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.