Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
RG9MTD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-418590-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RG9MTD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RG9MTD1 Double Nickase Plasmid (h) e il RG9MTD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRMT10C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RG9MTD1 Antibody (A-8): sc-515289
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RG9MTD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418590-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano TRMT10C codifica la subunità catalitica della metiltransferasi mitocondriale tRNA:m1G9, mentre RG9MTD1 (MRPP1) agisce insieme a MRPP2 (HSD17B10) e MRPP3 (KIAA0391) nel complesso mitocondriale RNasi P, che accoppia la processazione dei tRNA con la metilazione m1G9. Questa attività è parte integrante della maturazione dell’RNA mitocondriale, della funzione del mitoribosoma e di una fosforilazione ossidativa efficiente, poiché sostiene una traduzione mitocondriale accurata. L’alterazione della processazione dei tRNA dipendente da TRMT10C/RG9MTD1 compromette la biogenesi della catena respiratoria e l’omeostasi energetica cellulare, collegando questa via ai fenotipi di disfunzione mitocondriale osservati in contesti di malattie neurometaboliche. Di conseguenza, TRMT10C/RG9MTD1 è spesso studiato in modelli di espressione genica mitocondriale, proteostasi e risposte allo stress che convergono sul trasporto di elettroni e sulla segnalazione correlata all’apoptosi.
RG9MTD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRMT10C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRMT10C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRMT10C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRMT10C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.